000011 生产工艺
由用于食品的其他类胡萝卜素生产中常用的合成中间体，经过维蒂希聚合反应制备而成的合成番茄红素。商业上用于食品的配方型番茄红素制剂，是将其配制成悬浮于食用油中的乳液或水溶型的粉末。
000012 性状
番茄红素晶体为红色，几乎不溶于水，溶于氯仿等有机溶剂，对热、光、空气和湿度均敏感，容易氧化。
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项 目 |
指 标 |
检验方法 |
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番茄红素含量，% |
总番茄红素 |
≥ |
96 |
附录A中A.1 |
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全－反式－ 番茄红素 |
≥ |
70 |
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干燥失重，% |
≤ |
0.5 |
GB 5009.3减压干燥法 |
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铅（Pb），mg/kg |
≤ |
1 |
GB 5009.12 |
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阿朴-12’-番茄红素醛，% |
≤ |
0.15 |
附录A中A.2 |
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三苯基氧膦(TPPO)，% |
≤ |
0.01 |
附录A中A.3 |
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000013 技术要求
附 录 A
附 录 B
检验方法
B.1 总番茄红素含量和全－反式－番茄红素的含量的测定
B.1.1 方法原理
用高效液相色谱法在下列条件下测定总番茄红素含量和全－反式－番茄红素的含量
B.1.2 试剂和材料(注意：所有溶剂均应为色谱级)
A.1.2.1 正己烷。
A.1.2.2 用0.025%特丁基对苯二酚（BHT）稳定的四氢呋喃。
A.1.2.3 n-乙基－二异丙胺。
A.1.2.4 番茄红素标准品纯度≥95％。
B.1.3 仪器和设备
A.1.3.1紫外/可见分光光度计，配备1cm吸收池。
A.1.3.2 高效液相色谱系统，配备合适的泵、进样器、色谱柱恒温箱和积分仪。
A.1.3.3 色谱柱：2根相连的不锈钢柱（250x4.0 mm）。
A.1.3.4 固定相：Nucleosil 300-5，5mm
A.1.3.5 HPLC条件
流速： 0.8 mL/min
进样量： 20 µL
柱温： 20℃
检测波长： 470 nm
流动相： 0.15% n-乙基－二异丙胺的正己烷溶液（V/V）
A.1.3.6 HPLC测定用标准溶液：
精密称取番茄红素标准品5.5-6.5mg，置100mL量瓶中，加入特丁基对苯二酚（BHT）稳定的四氢呋喃5ml使溶解，用正己烷稀释至刻度。作为HPLC测定用标准品溶液。
A.1.3.7 分光光度测定用标准溶液：
精密量取上述HPLC测定用标准溶液5.0mL，置100mL量瓶中，用正己烷稀释至刻度。作为分光光度测定用标准溶液。
A.1.3.8 样品溶液
精密称取本品4.5-5.5mg，置100mL量瓶中，加入特丁基对苯二酚（BHT）稳定的四氢呋喃5mL使溶解，用正己烷稀释至刻度。
B.1.4 分析步骤与结果计算
A.1.4.1 分光光度法测定番茄红素：
A.1.4.1.1 分析步骤
用1cm吸收池，以正己烷为空白，在最大吸收波长处（大约470nm）测定上述分光光度测定用标准溶液的吸收值。
A.1.4.1.2 结果计算：
…………………………………………(A.1)
式中：
Cst—分光光度测定用标准溶液中番茄红素的浓度（mg/L）；
A—最大吸收波长处的吸收度；
3450—全－反式－番茄红素在正己烷中的吸收系数A
；
10000—稀释系数。
A.1.4.2 HPLC分析测定：
A.1.4.2.1 分析步骤
重复进样20mLHPLC测定用标准溶液，记录测定出的番茄红素异构体的总峰面积（除去溶剂峰），从重复进样中计算峰面积平均值，并按下式计算番茄红素响应因子(RF):
……………………………………………………(A.2)
式中：
RF—番茄红素的响应因子（AU x L/mg）；
Ast—番茄红素总峰面积的平均值（AU）；
Cst—分光光度测定用标准溶液中番茄红素的浓度（mg/L）；
20—由分光光度测定用标准溶液制备HPLC测定用标准溶液的稀释系数；
取样品溶液进样，并记录所有番茄红素异构体的峰面积。
A.1.4.2.2 结果计算
保留时间：
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番茄红素异构体 |
相对保留时间* |
绝对保留时间（约） |
|
13-顺式-番茄红素 9-顺式-番茄红素 全-反式-番茄红素 5-顺式-番茄红素 |
0.6 0.8 1.0 1.1 |
14min 19min 22min 24min |
*相对于全-反式-番茄红素
按下式计算总番茄红素的含量：
总番茄红素(%)= (Atrans+A5cis+A9cis+A13cis+Axcis) ×0.1 × 100………… (A.3)
RF × Ws
式中：
Atrans—全-反式-番茄红素峰面积(AU)；
A5cis,A9cis,和A13cis—5顺式－，9顺式－和13顺式－番茄红素的峰面积(AU)；
Axcis—如检测到其它顺式异构体的峰面积(AU)；
0.1—样品溶解的体积(L)；
RF—番茄红素的响应因子(AUxl/mg)；
Ws—样品取样量(mg)。
按下式计算全-反式-番茄红素的含量：
全-反式-番茄红素（％）＝ Atrans × 0.1 ×100
RF×Ws
B.2 阿朴-12’-番茄红素醛的测定
B.2.1 方法原理
高效液相色谱法
B.2.2 试剂(注意：所有溶剂均应为色谱级)
A.2.2.1 正己烷。
A.2.2.2 三乙胺（TEA）。
A.2.2.3 四氢呋喃（THF）。
A.2.2.4 用特丁基对苯二酚（BHT）稳定的甲苯（0.5g特丁基对苯二酚（BHT）溶于1000mL甲苯中）。
A.2.2.5 阿朴-12’-番茄红素醛（也叫番茄红素C25-醛）标准品。
B.2.3 仪器和设备
A.2.3.1 高效液相色谱系统，配备合适的泵、进样器和积分仪
A.2.3.2 色谱柱：不锈钢柱（200x4.0mm）
A.2.3.3 固定相：硅胶 Nucleosil Si 100 3mm
A.2.3.4 检测器：紫外/可见分光光度计，或可见分光光度计
A.2.3.5 HPLC条件：
流速： 2.0 mL/min
进样量： 5.0 mL
检测波长：435nm
流动相： A－正己烷
B－正己烷：三乙胺（99.9:0.1）(V/V)
C－正己烷：四氢呋喃（80:20）(V/V)
梯度：
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时间，分钟 |
A% |
B% |
C% |
|
0 |
80 |
20 |
0 |
|
16 |
60 |
20 |
20 |
|
22 |
40 |
20 |
40 |
|
24.5 |
80 |
20 |
0 |
A.2.3.6 标准品溶液
精密称取阿朴-12’-番茄红素醛对照品14.5-15.5mg，置50mL量瓶中，用特丁基对苯二酚（BHT）稳定的甲苯溶解并稀释至刻度。精密量取2mL，置100mL量瓶中，用特丁基对苯二酚（BHT）稳定的甲苯稀释至刻度。
A.2.3.7 样品溶液
精密称取本品29.0-31.0mg，置10mL量瓶中，用特丁基对苯二酚（BHT）稳定的甲苯溶解并稀释至刻度，将该溶液超声处理10min。
B.2.4 结果
阿朴-12’-番茄红素醛的保留时间约为14min，其相对于全－反式－番茄红素的相对保留时间为1.6。
B.2.5 计算：
阿朴-12’-番茄红素醛（％）＝ As×Wst×10 ×100………………………(A.4)
Ast×Ws×2500
式中：
As—样品峰面积；
Ast—标准品峰面积；
Wst—标准品取样量(mg)；
Ws—样品取样量(mg)；
10—样品溶解的体积(ml)；
2500—对照品溶解体积(50mL)乘以稀释倍数(50)。
B.3 三苯基氧膦（TPPO）的测定
B.3.1 方法原理
在下列条件下用HPLC方法检测。
B.3.2 试剂
A.3.2.1正己烷。
A.3.2.2异丙醇。
A.3.2.3 四氢呋喃（THF）。
A.3.2.4三苯基氧膦 （TPPO）(纯度≥99%)
注意：所有试剂均应是色谱级。
B.3.3 仪器和设备
A.3.3.1 高效液相色谱系统，配备合适的泵、进样器和积分仪。
A.3.3.2色谱柱：不锈钢柱（150×4.6mm）。
A.3.3.3固定相：硅胶基柱 Supelcosil Lc-Si, 5μm 或类似的柱。
A.3.3.4检测器：紫外检测器。
A.3.3.5 HPLC条件：
柱温： 20℃。
流动相：异丙醇:正己烷（1:24 V/V）。
流速：1.5mL/min。
进样量：50μL。
检测波长：210nm。
TPPO的保留时间大约为8.1min。
B.3.4 分析步骤
标准溶液：精密称取10mg的TPPO标准品，用THF（四氢呋喃）溶解，定量移入1000mL容量瓶中，用四氢呋喃稀释至刻度。
样品溶液：精密称取1000mg的样品，用四氢呋喃溶解，定量移入100mL容量瓶中，用四氢呋喃稀释至刻度。
B.3.5 结果计算
…………………….(A.5)
式中：
As—样品峰面积 ；
Ast—标准峰面积；
Pst—TPPO标准品的纯度的比例(例如：如果标准物质的纯度为99%，该数值应为0.99）；
Wst—标准品的重量（mg）；
Ws—样品重量（mg）。
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